解决方案
威斯康辛医学院的Link实验室研究眼部发育和疾病，重点研究斑马鱼视网膜神经发生模型。Link实验室的博士研究生Eric Clark试图创构建一幅深度约750微米mm、直径约3 mm的斑马鱼大脑全体积3D图像。为了对神经系统成像，首先使用在神经元泛表达启动子后连接eGFP的基因工具转染斑马鱼，以便在中枢神经系统的所有神经元中产生绿色荧光。
样品清理和物镜
为了减少折射率(Refractive Index, RI)变化引起的散射，需通过被动法透明化切割成小块的中枢神经样品。基于Histondenz的定制折射指数匹配解决方案，使整个光路中的RI保持一致。使用Leica HC FLUOTAR L25×/1.00 IMM物镜[1]对制备的器官样品进行成像，该物镜在1mm× 1mm的范围内提供250 nm的光学分辨率，最大自由工作距离为6 mm。该物镜配备了电动校正环（motCORR），可调整以补偿深度对RI变化的影响。
收集高分辨率大视场的信号
为从整个大脑收集数据，Eric使用了LAS X NAVIGATOR采集软件的拼图功能。Navigator允许用户简单地记录大量显微视场下拼接后的图片，并将它们融合为单个3D数据集，同时自动平衡图像采集和拼接过程中的光强变化。所得数据可以通过LAS X内3D查看器的3D可视化软件来呈现（参见动图01）。
最终数据包含286个图像平面，每个平面为5675× 7836个像素。总共12.7千兆个立体像素。
![[Translate to chinese:] Multicolor fixed STED image. Inner ear section, mouse, TauSTED Xtend 589 on AF488 and TauSTED Xtend 775 on AF633-Phalloidin. Sample courtesy of Dennis Derstrof, Klinik für Hals-, Nasen und Ohrenheilkunde, Universität Marburg & Prof. Dr. Dominik Oliver aus dem Institut für Physiologie und Pathophysiologie, Abteilung für Neurophysiologie, Universität Marburg.](/fileadmin/_processed_/c/a/csm_Inner_ear_section_mouse_multicolor_fixed_TauSTED_Xtend_892de785d4.jpg "[Translate to chinese:] Multicolor fixed STED image. Inner ear section, mouse, TauSTED Xtend 589 on AF488 and TauSTED Xtend 775 on AF633-Phalloidin.")
