用于病毒复制研究的正置荧光显微镜THUNDER-DM6B
病毒可以借助几种显微镜技术进行研究。根据显微镜的放大倍数和分辨率,可以在组织水平、细胞水平或病毒粒子水平进行观察(图1)。通常,病毒粒子本身只能通过电子显微镜或超分辨显微镜来分辨。在细胞水平上,病毒大多借助先进的宽场荧光或共焦显微镜进行观察。在组织中,明场显微镜或基本的宽场荧光显微镜足以用于病毒研究。但是显微技术的鉴别并不是严格的。
徕卡专利的THUNDER实时成像(专利号WO2019 /185174 A1)可以帮助提高背景信号比,减少离焦模糊。相关的对比度增强可以揭示显微图像中的附加信息。

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(左侧为普通DM6B的宽场荧光成像,右侧为THUNDER DM6B)
全景大图无缝拼接
无需任何软件后处理
实时扫描,即拍即有
病毒蛋白的免疫荧光检查
在测序技术、生物信息学和电子显微镜中,Ogando等人通过荧光显微镜分析了感染细胞:VeroE6细胞生长在玻璃盖玻片上,感染SARS-CoV-2,并用多聚甲醛固定。然后,用事先暴露于SARS-CoV的兔子或小鼠的抗血清孵育细胞(图2)。用荧光标示的二级抗体检测与veroe6细胞SARS-CoV-2结构结合的SARS-CoV源性抗体。此外,细胞核用Hoechst染色。用DM6 B直立荧光显微镜进行荧光成像。

SARS-CoV抗血清与SARS-CoV-2的交叉反应
免疫荧光显微镜显示,许多SARS-CoV抗血清在SAR-SCoV-2感染细胞(病毒蛋白nsp3、nsp4、nsp5、nsp8、nsp9、nsp13、nsp15、N、M)中具有交叉反应性。这一事实意味着,针对SARS-CoV产生的抗血清也导致SARS-CoV-2感染细胞的特征性荧光染色(图3)。nsps出现在感染细胞的核周区,而N蛋白则分布在胞浆中。在高尔基体中检测到M蛋白。