显微镜知识库

徕卡显微系统的知识库提供有关显微镜学科的科学研究和教学材料。内容旨在对显微镜初学者、有经验的显微镜操作实践者和使用显微镜的科学家在他们的日常工作和实验有所帮助。这里有探索交互式教程和应用笔记，你可以找到你需要的显微镜的基础知识以及前沿技术——快来加入徕卡显微知识社区，分享您的专业知识！

Donor (D) and acceptor (A) molecule which participate in FRET (Förster resonance energy transfer).

荧光寿命成像与荧光共振能量转移

荧光寿命是荧光团在发射荧光光子返回基态之前保持其激发态的平均时间长度。这取决于荧光团的分子组成和纳米环境。 FLIM将寿命测量与成像相结合：对每个图像像素以测得的荧光寿命进行颜色编码，产生额外的图像反差。因此，FLIM可以提供关于荧光分子空间分布的信息和有关其生化状态或纳米环境的信息。…

对囊泡运输的见解

STELLARIS 可为囊泡运输的动态、结构和机理研究提供完整的互补信息。

通过非拟合且简便的 FRET-FLIM 方法可视化蛋白质 - 蛋白质相互作用

了解活细胞中的分子相互作用对于解读大多数细胞功能背后的分子机制至关重要。研究蛋白质-蛋白质相互作用的金标准是福斯特共振能量转移（FRET）。尽管有几种方法可以在生物样品中证明FRET，但使用荧光寿命成像显微镜（FLIM）可以基于仅供体荧光的行为直接量化FRET。

Living HeLa cells stained with WGA-488 (yellow), SPY-Actin (cyan), and SiR-Tubulin (magenta). Instant Computational Clearing (ICC) was applied.

如何进行动态多色延时成像

本文将举例说明 Mica 进行动态活细胞成像的能力。活细胞成像揭示了各种细胞事件。由于其中许多事件具有快速动态性，显微镜成像系统必须足够快才能记录下每一个细节。这种成像系统的一个主要优势是能够同时捕获多个荧光成像通道，以精确地显示它们的时空相关性。

Spectral separation of 11 fluorophores coupled to polystyrene beads on a STELLARIS confocal system.

通过 11 种颜色的光谱分离实现超多标记

荧光显微镜是生命科学研究的基本工具，随着细胞组织和模式生物多色标记策略的发展而不断发展和成熟。分子特异性标记多种物种的能力需要适当的工具来识别样品中的多种荧光标签。严格分离多个标签对于获得有意义的成分、丰度、结构和功能读数至关重要。这种所谓的超多标技术在揭示组织组织、癌症进展、肿瘤免疫相互作用和传染病机制等关键方面已变得十分突出。

Two-color caspase assay with tile scan. U2OS cells were treated with the nuclear marker DRAQ5 (magenta) and CellEvent™ (yellow).

关注星形孢菌素诱导细胞凋亡过程中的多个事件

用于研究细胞凋亡或程序性细胞死亡的市售试剂盒用于测量化学品或潜力新药的毒性。本期MicaCam中，我们将呈现如何通过在细胞凋亡试剂盒添加额外标记物，显著增加研究人员从同一实验中获得的信息量。在延时成像期间同时捕捉所有标记物，可以对星形孢菌素诱导细胞死亡过程中多个事件的精确顺序进行定量分析。

Image of murine-brain tissue showing a region removed with UV laser microdissection.

不同组织样品制备方法的RNA质量

本文介绍了样品制备过程和紫外激光显微切片（UV LMD）对小鼠脑组织冷冻切片RNA质量的影响。为在提取RNA时获取良好的结果，从高品质组织开始并在处理前后检查RNA质量至关重要。RNA完整性指数（RIN）以1到10的等级标准来显示样品质量。简言之，RIN数值越高，RNA质量越高。这项研究结果表明，可以利用紫外激光显微切片技术，可以从单个组织细胞中获取品质稳定的RNA。

Projection of a confocal z-stack. Sum159 cells, human breast cancer cells kindly provided by Ievgeniia Zagoriy, Mahamid Group, EMBL Heidelberg, Germany. Blue–Hoechst - indicates nuclei, Green–MitoTracker mitochondria, and red–Bodipy - lipid droplets

低温光学显微镜的新成像工具

荧光显微镜图像能够为cryo-FIB加工提供定位支持，其质量决定了所制备薄片的结果。本文描述了LIGHTNING技术是如何显著提高图像质量，以及如何利用该技术基于荧光寿命的信息来辨别样品的不同结构。

Transverse histological cut of a rabbit tongue. 50 Mpixels images (2326 µm x 1739 µm) in 14 x 18 tiles. Lifetime gives an additional contrast that allows to differentiate different structures in histological stainings.

荧光寿命成像显微镜（FLIM）指南

荧光寿命成像显微镜（FLIM）利用荧光染料的固有特性生成图像。荧光分子已成为细胞生物学家的重要工具。荧光分子被广泛应用于显微镜观察细胞、组织甚至整个生物体内的许多不同结构、目标和动态过程。