冷冻透射电子显微镜的投入式冷冻技术：应用
低温下观察完全含水、未染色样本的透射电子显微镜（cryo TEM）是结构生物学、细胞生物学、药理学和其他科学分支的通用工具。通过将标本放入冷冻剂中进行超快速冷冻（投入式冻结）是一种常用的方法，用于制备在透射电镜观察的各种标本。本文是对投入式冷冻的补充，介绍了在不同领域使用投入式冷冻标本的三种冷冻TEM应用。
冷冻透射电子显微镜的投入式冷冻技术：基本原理
透射电子显微镜（TEM）所需的高真空度极大地减弱了研究自然存在于水相中的标本的能力：将“湿”标本暴露在远低于水蒸汽压的压力下，将导致水相在真空中迅速沸腾，对标本的结构造成破坏性后果。因此，在常规TEM中使用了各种方法在显微观察前干燥标本——这样一个样品制备步骤，通常导致实验结果出现假象。
Video Tutorials: Filling and Assembling of Different Carriers for High-Pressure Freezing
High pressure freezing (HPF) is a cryo-fixation method primarily for biological samples, but also for a variety of non-biological materials. It is a technique that yields optimal preservation in many…
冷冻断裂与冷冻蚀刻基础介绍
冷冻断裂是一种将冰冻样本劈裂以露出其内部结构的技术。冷冻蚀刻是指让样本表面的冰在真空中升华，以便露出原本无法观察到的断裂面细节。金属/碳复合镀膜能够实现样本在SEM（块面）或TEM（复型）中的成像，主要用于研究如细胞器、细胞膜，细胞层和乳胶。这项技术传统上用于生物学应用，但现在逐渐在物理学和材料科学中展现出重要意义。近年来，研究人员通过冷冻断裂电子显微镜，尤其是冷冻复型免疫标记（FRIL），对膜蛋…
样本修块简介
使用超薄切片机制作样本超薄切片前需要预制样本。在预制过程中，必须特别留意样本尺寸（切片尺寸）、样本位置（目标定位）和块面边缘精准度。这个过程通常叫做修块，在此过程中样本大多被修块成金字塔截头锥体的形状。
用徕卡EM ACE600电子束对DNA进行甘油喷雾/铂金低角度旋转遮光
生物学中，甘油喷雾/低角度旋转遮光[1]是和其他技术结合，将直径较小导致染色不足的结构可视化的准备技术。该方法常用于含有卷曲螺旋结构域的蛋白质或DNA的标本。
冷冻替代的简要介绍
冷冻替代是一种在足够低温的条件下进行的脱水过程，以避免形成冰晶，并有效规避在环境温度下脱水后观察到的破坏性影响。在冷冻替代期间，“冷冻”水被有机溶剂溶解，有机溶剂通常也含有化学固定剂。冷冻替代与细胞成分的即刻物理固定（冷冻固定）以及树脂包埋相关联。一旦替代完成，样品会逐渐升温，并与常规制备的样品一样进行进一步处理。与化学固定技术相比，成功的冷冻固定及后续FS处理显示出优良的精细结构保存[2]。即使…
关于高压冷冻仪中液氮的热力学考虑
在高压冷冻过程中，待冷冻样品和冷却剂的相变导致我们对使用液氮作为冷冻剂提出一定的质疑。根据氮气的相图（图1），温度或压力的变化将改变该元素的状态。在环境压力下，氮气在-209.86℃至-195.80℃之间为液态。在有限的相位边界内，它是一个相当脆弱的平衡。
EM样本制备中对比显影的简要介绍
由于电子显微镜中的对比显影主要取决于细胞中有机分子的电子密度差，因此染色效率需取决于附着在生物结构上的染色剂的原子量。所以在电子显微镜中使用最广泛的染色剂是重金属铀和铅。尽管单独使用其中一种染色剂对于常规用途来说较为实用，但依次使用这两种染色剂（醋酸铀UA和柠檬酸铅的“双重染色”）则可以获得最高的对比度。
