这份指南旨在帮助用户优化受激发射损耗(STED)纳米成像的样品制备,特别是在使用徕卡微系统的STED显微镜时。它提供了单色STED成像用荧光标记的概述,并对其性能进行了评级。
关键学习点
- 推荐用于双色和三色STED成像的荧光标记组合,这些组合在检测时能降低串色概率。
- 讨论了免疫荧光标记的考虑事项以及详细实验方法,以获得高质量的图像,其中包括高信噪比的样品中感兴趣结构的图像。
- 回顾了上样和基底的重要细节,这些能够实现最佳成像,降低由介质引起的像差和自发荧光。
- 最后,对于活细胞的STED成像,提到了合适的荧光标记,包括荧光蛋白(FPs)和提供上佳性能的有机荧光染料。