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光谱检测-如何设定特定探针发射光的光谱检测范围
为了拆分多色成像的发射光谱,首先由分束器或色散元件将不同颜色的光引入到不同的方向[1],带通滤片则能够最大限度地减少串色,并抑制所有残留的激发光,最终到达传感器。在过去,常使用的滤片是普通的玻璃带通滤片。如今,一项革命性的设计诞生了,那就是在多波段组件(SP探测器)中使用光度计滑块。该设计可以极为有效地探测发射光,同时提供完全可调谐性,与此同时带来的好处是使光谱扫描成为了可能。使用白激光作为光源时…
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FRAP实验步骤式指南
漂白后荧光恢复(FRAP)已被认定为观察大分子平移扩散过程方面使用最为广泛的一种方法。由此产生的信息可用于确定动力学性质,如扩散系数、流动分数和荧光标记分子的传输速率。FRAP实验利用了短激光脉冲的荧光团辐照。先进的激光扫描显微镜如TCS…
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![[Translate to chinese:] John B. Gurdon [Translate to chinese:] John B. Gurdon](/fileadmin/_processed_/0/f/csm_John_B_Gurdon_dae2e40438.jpg)
2012年诺贝尔生理学或医学奖——干细胞研究
诺贝尔奖表彰了这两位科学家,他们发现成熟、分化的细胞可以被重编程为能够发育成身体所有组织的未成熟具有干性的细胞。他们的发现彻底改变了我们对细胞和生物体发育过程的理解。
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![[Translate to chinese:] Sub-Femtolitre volume_Fluorescence correlation spectroscopy (FCS) [Translate to chinese:] Sub-Femtolitre volume_Fluorescence correlation spectroscopy (FCS)](/fileadmin/_processed_/f/4/csm_Fluorescence_Correlation_Spectroscopy_FCS_sub-emtolitre_volume_f97c5a06e3.jpg)
荧光相关光谱(FCS)
荧光相关光谱学(FCS)通过测量亚飞升体积内荧光强度的波动来检测扩散时间、分子数量或荧光标记分子的暗态等参数。这项技术是在20世纪70年代初期由瓦特·韦伯(Watt Webb)和鲁道夫·里格勒(Rudolf Rigler)独立开发的。
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![[Translate to chinese:] Live cell imaging, 4 colors [Translate to chinese:] Live cell imaging, 4 colors: Mitochondria (MitoView Green, yellow) and actin (mNeonGreen, cyan) microtubuli (SIR-tubulin, magenta), endosomes (NIR750, green). Processed with DSE and DSE powered by Aivia.](/fileadmin/_processed_/a/7/csm_Live_cell_imaging_mitochondria_actin_microtubuli_endosomes_57f49c5797.jpg)
白激光
在生物医学应用中,共聚焦显微镜的完美光源它应该有足够的强度,可调谐的波长,以便同时激发一系列样品。此外,它应该成为荧光寿命实验的脉冲光源。这样的光源已经出现:白激光。它采用高能脉冲红外光纤激光器经过光子晶体光纤以产生连续光谱。通过声光调制滤片从该连续光谱中选择窄带激光。
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福斯特共振能量转移 (FRET)
荧光描述的是分子或原子在通过光的吸收激发电子系统后,自发发射光子的过程。发射的光子通常能量较低,因此波长较长(斯托克斯位移)。例如,蓝光激发可能导致绿色发射。如果第二个荧光分子能够吸收绿色光子,则该分子的发射再次发生斯托克斯位移,例如变为红色。这种再吸收在浓密样品中会导致测量误差(部分“内滤”效应)。在低浓度样品中,再吸收非常罕见。
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CARS 相干反斯托克斯拉曼散射显微镜简介
共聚焦和多光子成像技术仍然是对生物样本进行复杂研究的首选方法。这些技术可将生物样本中的典型结构或动态过程可视化,并依赖于样本中现有的自发荧光物质或合适的荧光染料。传统染色方法的缺点显而易见:标记耗时,染料会随时间褪色。此外,染料会失去强度并改变样本。染料通常会产生光毒性,对样本造成伤害,进而影响实验结果。CARS(相干反斯托克斯拉曼散射)显微镜是一种无需染料的方法,它通过显示结构分子的内在振动对比…
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![[Translate to chinese:] Scheme of a 2D mosaic scan. Drosophila melanogaster (eye section) [Translate to chinese:] Scheme of a 2D mosaic scan. Drosophila melanogaster (eye section)](/fileadmin/_processed_/e/b/csm_Mosaic_Intro_04_c164a21165.jpg)
马赛克图片
共焦激光扫描显微镜被广泛用于生成细胞、亚细胞结构甚至单分子的高分辨率三维图像。不过,越来越多的科学家正将生物研究的重点从单细胞研究扩展到整个器官和生物体,分析动物体内复杂的相互作用。
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共聚焦光学截面厚度
共聚焦显微镜用于光学切片比较厚的样本。最直接的问题是:1. 什么是“比较厚的样本”;2. 光学切片到底有多厚?这两个问题在一定程度上是相关的,即假设一份厚样本至少比光学切片厚10倍。