鱼类研究中的成像挑战
尽管斑马鱼有许多优点,但在成像方面仍然存在一些挑战,特别是对于活体标本:
胚胎的大小:
斑马鱼胚胎可以生长到几百微米,这在使用现代标准显微镜时可能会很具挑战性,尤其是在需要高分辨率时。
活胚胎的运动:
活胚胎是自然移动的,这使得图像捕捉变得复杂。保持胚胎静止以进行成像而不限制其发育或行为仍然是一个挑战。
通过Mica克服成像障碍
Mica 通过在运动等挑战性条件下实现高质量成像来解决这些挑战。本案例研究展示了 Mica 如何通过成像自由移动的斑马鱼幼虫的血流来克服一些障碍。血流通过两种荧光标记可视化:DsRed 用于红细胞,eGFP 用于血管。
寻找非固定幼虫
传统上,为了避免繁琐的重新定位过程,幼虫会被固定。Mica 的“样本查找器”功能通过生成微小努力下的孔板概览来简化这一过程。对于更高倍数成像,导航就像在概览上点击位置或在 Mica 的完全集成导航工具中进行其他采集一样简单。如果幼虫移动,低倍数(1.6 倍)的螺旋扫描可以快速定位它,从而允许切换回更高倍数(10 到 63 倍)进行详细成像。
动态事件的延时成像
Mica 支持多种成像模式,包括透射光和高对比度集成调制对比(IMC;兼容塑料底载体,视频 1)成像以及宽场和共聚焦模式下的荧光成像。这种多样性使研究人员能够选择最适合其实验的成像模式。
使用水浸物镜进行长期高倍成像(在工作距离的限制内)进一步得到了反馈驱动的自适应浸没的支持,以确保持续浸没。
宽场成像是捕捉快速、大规模事件的主要选择,但以下数据(视频 2)清楚地表明,在某些限制条件下,共聚焦成像也可以实现可比的高帧率,但提供了更好的光学切片能力。Mica 同时获取所有标签的能力消除了由于多个标签导致的帧率降低,并防止了时空不匹配。