THUNDER Imager EM Cryo CLEM
深入了解细胞结构生物学
THUNDER
是的，THUNDER成像仪始终保留原始数据和THUNDER数据。但也可以只保留THUNDER数据，以减少数据量。
THUNDER成像仪提供三种方法： 即时计算清除 (ICC)、小体积计算清除 (SVCC) 和大体积计算清除 (LVCC)。最快的方法是 ICC，可实时清除二维和三维图像上的背景。通过将 ICC 与基于决策掩码的 3D 解卷积相结合，可以进一步提高图像质量。SVCC 和 LVCC 方法就采用了这种组合。所有这三种方法都是即时运行的，在采集过程中就已显示在查看器中。所有THUNDER方法都不会影响采集速度。请参阅 LAS X THUNDER 教程。
CC（计算清除）提供两个参数： "特征比例 "和 "强度"。特征比例定义了需要从背景中去除遮挡的特征的最大尺寸。该参数的默认值是为每个放大倍数设置的，非常保守，但用户可以对其进行微调。"强度 "定义要去除的模糊程度。默认值取决于所选的THUNDER方法。"特征尺度 "和 "强度 "均可针对每个荧光通道单独调整。 请参阅 LAS X THUNDER 教程。
"THUNDER图像以典型的徕卡文件格式 "lif"、"lof "和 "xlef"（XLEF 与 TIF、JPEG、PNG、BMP 或 LOF 相结合）保存。这些既定格式与 Aivia 等图像分析软件包以及其他使用开源库生物格式（如 FIJI 和 Omero）的分析软件兼容。
数据还可以导出为 TIF、JPEG、PNG 和 BMP 等图像格式以及 AVI、QuickTime、MP4 和 WMV 等电影格式。
是的，拼图后且含有Z轴信息的数据可以进行 THUNDER。 唯一的大小限制是临时驱动器上的可用空间。
对此没有明确的答案。这在很大程度上取决于样本的特性。我们的 THUNDER 技术说明 包括一个 150 微米厚的脑切片示例，但这并不是极限。在该脑切片的上层，可以分辨和分割精细的细节。虽然较深层的分辨率和分割可能会降低，但 150 微米深度的成像可以显示原始数据中看不到的重要细节。
答案显然是肯定的。计算清除能有效区分信号和背景。只去除背景，保留信号并用于量化。在处理生物样本中经常出现的不同背景强度时，这一点非常重要。信号强度之间的比较需要先去除背景。计算清除功能可自动完成这项工作，而无需使用通常需要微调的本地背景去除算法。有关强度量化的更多信息，请参阅THUNDER技术说明。
通常情况下，THUNDER会在采集过程中即时应用并显示在查看器中。也可以在采集后应用THUNDER方法。请参阅 LAS X THUNDER 教程。
与解卷积比较： 所有THUNDER成像仪的核心技术都是 计算清除。与传统的宽场技术相比，计算清除技术可实时消除模糊，并将应用范围扩展至厚样本。THUNDER成像仪具有摄像系统的所有优点，如采集速度快、光照强度低、动态范围大和灵敏度高，可在生理条件下成像。小体积计算清除（SVCC）和大体积计算清除（LVCC）方法将计算清除与三维解卷积相结合，可进一步提高图像质量。LVCC 特别得益于计算清除，因为它使厚样本更容易进行解卷积。
与其他成像技术的比较：使用基于相机的成像系统获取光学切片的另一种方法是使用多点照明，例如尼普考圆盘或网格投影设备。后者在栅格不能锐利地投射到焦平面时就会产生伪影，因此在处理厚标本时会很吃力。此外，它们需要对每幅图像进行多次曝光，这不仅会减慢采集速度，还可能对样品造成更大的光损伤。另一方面，基于磁盘的系统必须处理针孔之间的有限距离问题，这在一定成像深度下会带来焦外平面的光污染。
三维样品光学切片的基准是共聚焦点扫描仪，它能提供高质量、高对比度的荧光图像。然而，使用点扫描共聚焦系统对大型样品进行成像非常耗时。
THUNDER成像仪是专门针对特定应用的集成式成熟系统解决方案。THUNDER成像仪系列为三维组织、三维细胞培养、模式生物和 CLEM 应用提供了解决方案。
THUNDER成像仪通过消除模糊，使厚样品也能进行分析，从而使用户能够对传统宽场系统无法处理的厚样品进行成像。
THUNDER成像仪使用高灵敏度相机，对样品的光剂量低，从而提高了生理相关性。此外，由于独立于背景的量化技术能够检测和分析图像中的更多对象，因此数据的统计意义也得以提高。
THUNDER成像仪跳过了后期处理步骤，从而最大限度地缩短了结果生成时间。三维宽场图像需要在图像分析前进行解卷积步骤。THUNDER成像仪不需要这一步骤，因为图像在采集过程中就已经THUNDER处理，可以立即用于分析，节省时间。
