电镜样品制备

冷冻电子断层扫描(CryoET)用于分辨细胞环境内的生物分子，分辨率达到前所未有的一纳米以下。

已刻蚀的晶圆和集成电路（IC）在生产过程中的半导体检测对于识别和减少缺陷非常重要。

荧光显微镜图像能够为cryo-FIB加工提供定位支持，其质量决定了所制备薄片的结果。本文描述了LIGHTNING技术是如何显著提高图像质量，以及如何利用该技术基于荧光寿命的信息来辨别样品的不同结构。

冷冻ET（电子断层扫描）是一种专用的透射电子显微镜技术，可以重建观察区域的三维体积。借助先进的冷冻EM（电子显微镜），图像分辨率可以提升到令人难以置信的亚纳米等级。因此，可以在细胞内的原生环境中研究蛋白质以及其他生物分子，从而揭示尚未探明的分子机制。由于细胞和组织必须薄到能够透过电子，样品必须进行切片以获取足够薄的样品体积（薄层）。为对样品中的靶区进行精确的三维定位，冷冻共聚焦显微镜是必不可少的工具。

低温电子断层扫描（CryoET）是一种成像技术，可以让研究人员以亚纳米分辨率观察蛋白质和其他大生物分子。了解分子的形状和结构，包括口袋和裂隙，可以帮助研究人员设计能够像拼图一样附着于分子的药物。低温ET成像也因此成为了解和治疗疾病和失调的重要基础。

Coral Life 提供了简化的活细胞 CLEM 解决方案，用于深入了解细胞成分随时间发生的结构变化。除了工作流程手册中描述的技术处理外，本文还提供了成功进行实验的其他知识。

许多电子显微镜（EM）工作流程始于样品固定，随后进行样品准备和电镜成像。然而，表现出有趣行为的样品往往很罕见，找到“合适的细胞”可能耗时且繁琐。活细胞光电联用工作流程允许您在相关生物过程发生时捕捉动态信息，并将这些观察放入其超微结构背景中。Coral life工作流程简化了这一过程，以优化您的表现并提高您的生产力。在本次网络研讨会上，我们将通过一个示例演示Coral life工作流程，展示如何在不妥协样品质量的情况下获得可重复的结果。

冷冻断裂和冷冻蚀刻是研究柔性膜相关结构（如紧密连接或肠道糖萼）的有用工具。冷冻断裂和冷冻蚀刻是两种互补的方法，通过样品玻璃化来保护目标结构，然后断开冷冻标本以揭示内部结构。冷冻蚀刻是一个后续步骤，在真空下表面冰升华以揭示更多细节。在这些技术中，喷镀金属或碳使样品能够直接在冷冻扫描电子显微镜（SEM）中成像，或作为复制膜在透射电子显微镜（TEM）中成像。这对技术用于研究细胞器、膜、层和乳液，特别适用于常规或冷冻电子显微镜无法解析的柔性结构。

本文主要介绍Cryo-CLEM技术及其为科学家带来的便益。此外，还特别说明了一些相关文献。 近期在冷冻电子显微镜工作流程领域取得的技术进步，让我们能够获取到细胞蛋白质社会学的3D数据，其分辨率更是达到前所未有的1纳米以下。工作流程中有一个步骤，需要从样品获取目标位置纳米级分辨率的图像，而要得到这样的结果，就需要用到冷冻光学显微镜。这种显微镜如果用于低温电子显微镜工作流程，通常就称为Cryo CLEM。

Coral Life工作流将动态数据与最佳的样品固定方式(高压冷冻)相结合。然而，如果您的细胞因为温度下降，或缺氧气、二氧化碳或营养物质缺乏而受到损伤，那么再好的样品保存也没有意义。这些因素将影响一系列的生物过程，甚至破坏原超微结构基础，影响您的分析。

With the Leica Nano Workflow, searching for the needle in the haystack is a thing of the past. Take advantage of correlative light and electron microscopy to identify directly the right cell at the right time and put dynamic live cell data into the ultrastructural context. The newly developed Nano Workflow gives you an integrated solution from targeting to insights that will boost your research. In this session we will demonstrate the benefits of the first commercial live-cell CLEM workflow without compromising health and integrity of the specimen.

The SARS-CoV-2 outbreak started in late December 2019 and has since reached a global pandemic, leading to a worldwide battle against COVID-19. The ever-evolving electron microscopy methods offer a plethora of new applications, allowing researchers to study viral structure, infection and replication. During this webinar, we provide an overview of these sophisticated techniques and illustrate how they provide insights into the intricate changes that viruses evoke when they infect cells. We cover the currently used preparation workflows for SEM and TEM, including room temperature, hybrid and dedicated cryo workflows.

The EM ICE High Pressure Freezer was developed with a unique freezing principle and uses only a single pressurization and cooling liquid: liquified nitrogen (LN2). This design enables three major benefits that lead to high-quality sample vitrification results.

本文介绍了如何利用冷冻光学显微镜，尤其是冷冻共焦显微镜来提高冷冻工作流程的可靠性。评估了EM网格和样品的质量，并分析了目标结构的分布。本文展示了如何将冷冻共焦3D数据投射到SEM图像上，将感兴趣结构可靠地保留在FIB切割的薄片内，以便在冷冻TEM中进行进一步研究。

神经科学的一个基本问题就是突触的结构与其功能特性之间有何关系？过去几十年，电生理学揭示了突触传递机制，而电子显微镜（EM）深入探索了突触形态。用于关联突触生理学和超微结构的方法可以追溯到20世纪中叶。目标是获得突触传递的快照，即捕获电子显微照片中的动态过程。