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什么是DIC显微镜,它的作用是什么?
DIC是微分干涉对比法,这是一种显微镜光学对比技术,通过其可以获得充足的对比度和分辨率,从而观察到未染色的生物标本的细胞结构。它也能帮助观察材料表面上小的高度差异。只用偏振光照亮样本时,偏振光被分散成两束具有正交偏振平面的不同光线。当光线在样本中经过不同的折射或散射后,会出现不同的相移。这些光线再次汇聚时,它们会相互干扰并变成椭圆偏振光。这种偏振光通过分析仪时会变为振幅偏移。在DIC图像中,可以观察到差异小于1/1000个波长的相移(当用相机传感器检测时)。DIC显微图像呈浮雕状,看上去有阴影。
如何设置DIC显微镜?
DIC显微镜是一种宽视场显微镜,在光源镜与聚光镜之间,以及在物镜和相机传感器或目镜之间,都设有偏振滤光器和沃拉斯顿棱镜。如需更多DIC显微镜设置信息,请参阅文章: 微分干涉对比(DIC)与金相学
光源散发出的光会穿过滤光器,变成45°的偏振光。在穿过沃拉斯顿棱镜后,光会被分成垂直偏振分量,其中一个为0°偏振,另一个为90°偏振。聚光镜将光聚集在标本上,再由2束偏振角度不同的连贯平行光线照射到标本上。光线穿过不同的光路长度,因为其穿过样本的路径上可能存在厚度或折射率差异。
最后的结果是,一条光线相对于另一条光线出现相移。垂直偏振光通过物镜和另一个沃拉斯顿棱镜后,重新组合成135°偏振光。根据光路长度的不同,这两束光线的干扰会产生建设性(增亮)或破坏性(变暗)干扰,使得原本用明场显微镜几乎观察不到的结构现在可通过DIC显微镜观察到。
最后,偏振滤光器(也称为分析仪)会将未发生任何相移的直接透射光滤除,其只允许135°的偏振光通过。如需了解详细信息,请参阅文章: 微分干涉对比(DIC)